醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法

 

衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號 

第一章  總  則

第一條  為規(guī)范醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理，保障臨床基因擴增檢驗質(zhì)量和實驗室生物安全，保證臨床診斷和治療科學(xué)性、合理性，根據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)管理條例》、《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》和《醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理辦法》，制定本辦法。

第二條    臨床基因擴增檢驗實驗室是指通過擴增檢測特定的DNA或RNA，進行疾病診斷、治療監(jiān)測和預(yù)后判定等的實驗室，醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)當(dāng)集中設(shè)置，統(tǒng)一管理。

第三條  本辦法適用于開展臨床基因擴增檢驗技術(shù)的醫(yī)療機構(gòu)。

第四條  衛(wèi)生部負(fù)責(zé)全國醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室的監(jiān)督管理工作。各省級衛(wèi)生行政部門負(fù)責(zé)所轄行政區(qū)域內(nèi)醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室的監(jiān)督管理工作。

第五條  以科研為目的的基因擴增檢驗項目不得向臨床出具檢驗報告，不得向患者收取任何費用。 

第二章  實驗室審核和設(shè)置

第六條  醫(yī)療機構(gòu)向省級衛(wèi)生行政部門提出臨床基因擴增檢驗實驗室設(shè)置申請，并提交以下材料：

（一）《醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證》復(fù)印件；

（二）醫(yī)療機構(gòu)基本情況，擬設(shè)置的臨床基因擴增檢驗實驗室平面圖以及擬開展的檢驗項目、實驗設(shè)備、設(shè)施條件和有關(guān)技術(shù)人員資料；

（三）對臨床基因擴增檢驗的需求以及臨床基因擴增檢驗實驗室運行的預(yù)測分析。

第七條  省級臨床檢驗中心或省級衛(wèi)生行政部門指定的其他機構(gòu)（以下簡稱省級衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)）負(fù)責(zé)組織醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術(shù)審核工作。

第八條  省級臨床檢驗中心或省級衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)應(yīng)當(dāng)制訂醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)審核辦法，組建各相關(guān)專業(yè)專家?guī)�，按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗工作導(dǎo)則》對醫(yī)療機構(gòu)進行技術(shù)審核。技術(shù)審核辦法報請省級衛(wèi)生行政部門同意后實施。

第九條  醫(yī)療機構(gòu)通過省級臨床檢驗中心或省級衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)組織的技術(shù)審核的，憑技術(shù)審核報告至省級衛(wèi)生行政部門進行相應(yīng)診療科目項下的檢驗項目登記備案。

第十條  省級衛(wèi)生行政部門應(yīng)當(dāng)按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》和《醫(yī)療機構(gòu)臨床檢驗項目目錄》開展醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗項目登記工作。

第十一條  基因擴增檢驗實驗室設(shè)置應(yīng)符合國家實驗室生物安全有關(guān)規(guī)定。

第三章  實驗室質(zhì)量管理

第十二條  醫(yī)療機構(gòu)經(jīng)省級衛(wèi)生行政部門臨床基因擴增檢驗項目登記后，方可開展臨床基因擴增檢驗工作。

第十三條  醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當(dāng)按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗工作導(dǎo)則》，開展臨床基因擴增檢驗工作。

第十四條  醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室人員應(yīng)當(dāng)經(jīng)省級以上衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)技術(shù)培訓(xùn)合格后，方可從事臨床基因擴增檢驗工作。

第十五條  醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當(dāng)按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗工作導(dǎo)則》開展實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制，參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心或指定機構(gòu)組織的實驗室室間質(zhì)量評價。衛(wèi)生部臨床檢驗中心或指定機構(gòu)應(yīng)當(dāng)將室間質(zhì)量評價結(jié)果及時通報醫(yī)療機構(gòu)和相應(yīng)省級衛(wèi)生行政部門。

第四章  實驗室監(jiān)督管理

第十六條  省級臨床檢驗中心或省級衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗工作導(dǎo)則》對醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室的檢驗質(zhì)量進行監(jiān)測，并將監(jiān)測結(jié)果報省級衛(wèi)生行政部門。

第十七條  省級以上衛(wèi)生行政部門可以委托臨床檢驗中心或者其他指定機構(gòu)對醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室進行現(xiàn)場檢查。現(xiàn)場檢查工作人員在履行職責(zé)時應(yīng)當(dāng)出示證明文件。在進行現(xiàn)場檢查時，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查醫(yī)療機構(gòu)不得拒絕或隱瞞。

第十八條  省級以上衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)對室間質(zhì)量評價不合格的醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室提出警告。對于連續(xù)2次或者3次中有2次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴增檢驗結(jié)果不合格的醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室，省級衛(wèi)生行政部門應(yīng)當(dāng)責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴增檢驗項目，限期整改。整改結(jié)束后，經(jīng)指定機構(gòu)組織的再次技術(shù)審核合格后，方可重新開展臨床基因擴增檢驗項目。

第十九條  對于擅自開展臨床基因檢驗項目的醫(yī)療機構(gòu)，由省級衛(wèi)生行政部門依據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)管理條例》第四十七條和《醫(yī)療機構(gòu)管理條例實施細(xì)則》第八十條處罰，并予以公告。公告所需費用由被公告醫(yī)療機構(gòu)支付。

第二十條  醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室出現(xiàn)以下情形之一的，由省級衛(wèi)生行政部門責(zé)令其停止開展臨床基因擴增檢驗項目，并予以公告，公告所需費用由被公告醫(yī)療機構(gòu)支付：

（一）開展的臨床基因擴增檢驗項目超出省級衛(wèi)生行政部門核定范圍的；

（二）使用未經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗試劑開展臨床基因擴增檢驗的；

（三）在臨床基因擴增檢驗中未開展實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制的；

（四）在臨床基因擴增檢驗中未參加實驗室室間質(zhì)量評價的；

（五）在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的；

（六）以科研為目的的基因擴增檢驗項目向患者收取費用的；

（七）使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗工作的。

（八）嚴(yán)重違反國家實驗室生物安全有關(guān)規(guī)定或不具備實驗室生物安全保障條件的。

第五章  附 則

第二十一條  本辦法自發(fā)布之日起施行�！杜R床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)〔2002〕10號）同時廢止。 

二〇一〇年十二月六日

醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗

實驗室工作導(dǎo)則

   

一、臨床基因擴增檢驗實驗室的設(shè)計

（一）臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)計原則。原則上臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。這4個區(qū)域在物理空間上必須是完全相互獨立的，各區(qū)域無論是在空間上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。例如使用實時熒光PCR儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。各區(qū)的功能是：

1.試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。

2.標(biāo)本制備區(qū)：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護設(shè)備、個人防護和操作規(guī)范的要求。

3.擴增區(qū)：cDNA合成、DNA擴增及檢測。

4.擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增片段的進一步分析測定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。

（二）臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向。臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行，防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域�？砂凑諒脑噭﹥Υ婧蜏�(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進行�？赏ㄟ^安裝排風(fēng)扇、負(fù)壓排風(fēng)裝置或其他可行的方式實現(xiàn)。

（三）工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)。

1.試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)。

（1）2～8℃和-20℃以下冰箱。

（2）混勻器。

（3）微量加樣器（覆蓋0.2-1000µl）。

（4）可移動紫外燈（近工作臺面）。

（5）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭。

（6）專用工作服和工作鞋(套)。

（7）專用辦公用品。

2.標(biāo)本制備區(qū)。

（1）2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱。

（2）高速離心機。

（3）混勻器。

（4）水浴箱或加熱模塊。

（5）微量加樣器（覆蓋0.2-1000µl）。

（6）可移動紫外燈（近工作臺面） 。

（7）生物安全柜。

（8）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）。

（9）專用工作服和工作鞋(套)。

（10）專用辦公用品。

（11）如需處理大分子DNA，應(yīng)當(dāng)具有超聲波水浴儀。

3.擴增區(qū)。

（1）核酸擴增儀。

（2）微量加樣器（覆蓋0.2-1000µl），（視情況定）。

（3）可移動紫外燈（近工作臺面）。

（4）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）。

（5）專用工作服和工作鞋。

（6）專用辦公用品。

4.擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

視檢驗方法不同而定，基本配置如下：

（1）微量加樣器（覆蓋0.2-1000µl）。

（2）可移動紫外燈（近工作臺面）。

（3）消耗品：一次性手套、加樣器吸頭（帶濾芯）。

（4）專用工作服和工作鞋。

（5）專用辦公用品。

上述各區(qū)域儀器設(shè)備配備為基本配備，實驗室應(yīng)當(dāng)根據(jù)自己使用的擴增檢測技術(shù)或試劑的特點，對儀器設(shè)備進行必要的增減。

二、臨床基因擴增檢驗實驗室工作基本原則

(一)進入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進行，即試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

(二)各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用。

(三)不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。

(四)實驗室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

(五)工作結(jié)束后，必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū)的實驗臺表面應(yīng)當(dāng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效。由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動紫外燈（254nm波長），在工作完成后調(diào)至實驗臺上60～90cm內(nèi)照射。由于擴增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對（bp），對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須延長照射時間，最好是照射過夜。

(六)實驗室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，所有操作符合《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。

三、臨床基因擴增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項

(一)試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過擴增檢測區(qū)，試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。 

(二)標(biāo)本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在傳染危險性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

(三)擴增區(qū)。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動。必須注意的是，所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。

(四)擴增產(chǎn)物分析區(qū)。核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記）、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增產(chǎn)物時，必須使用洗板機洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl中，并且不能在實驗室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實驗室的地方棄掉。用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。

由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故應(yīng)當(dāng)注意實驗人員的安全防護。