無菌室一般是在生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟的一個(gè)小房間，面積不宜過大，約4m2~5m2，高2.5m左右即可。無菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間、凈化風(fēng)淋間及更衣間。無菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備必須有空氣過濾裝置。無菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無菌室的紫外線燈距離工作臺(tái)面 lm。無菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整，不易藏污垢，便于清潔。工作臺(tái)的臺(tái)面必須處于水平狀態(tài)。工作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)在更衣室穿戴好滅菌的衣、帽、鞋，經(jīng)過凈化風(fēng)淋室，再到緩沖間，然后進(jìn)入無菌室進(jìn)行檢驗(yàn)工作。

縣級市的企業(yè)一般實(shí)驗(yàn)室多使用小型超凈工作臺(tái)。超凈工作臺(tái)其結(jié)構(gòu)簡單，便于移動(dòng)，工作臺(tái)內(nèi)有紫 外燈和凈化風(fēng)機(jī)，外部是推拉式小門或開兩個(gè)洞的玻璃門，操作時(shí)將雙臂伸進(jìn)去即可。

(1)無菌操作間的潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級，室內(nèi)溫度保持在20℃-24℃，濕度保在45%~60%，超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到100級。無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)，在無菌室或超凈工作臺(tái)開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的 15mL，放至凝固后，倒置于36℃ ±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48h，證明無菌后，取平板 3～5個(gè)，分別放置在工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于36℃ ±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48h，取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個(gè)菌落，10000級的潔凈室平均不得超過3個(gè)菌落，如超過限度，應(yīng)對無菌室進(jìn)行徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。

 (2)無菌室應(yīng)保持清潔整齊，室內(nèi)僅存放必須的檢驗(yàn)用具如酒精燈、酒精棉、打火機(jī)、鑷子、接種環(huán)、剪刀及玻璃筆等。嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

 (3)無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液 ，如 5%的甲酚溶液，75%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液等等。

 (4)需要帶入無菌室使用的儀器、藥品、玻璃器皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密或應(yīng)經(jīng)適宜的方法滅菌。如培養(yǎng)皿、吸管用不銹鋼簡裝好在160℃-170℃的干燥箱中滅菌 1h~2h；生理鹽水用高壓滅菌器于121℃滅菌20分鐘等。

 (5)無菌室使用前必須打開無菌室和緩沖間的紫外燈輻照30分鐘以上，并且同時(shí)打開凈化風(fēng)機(jī)進(jìn)行換氣。 在紫外燈關(guān)閉后半小時(shí)方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行工作。在樣品檢驗(yàn)完畢后，應(yīng)及時(shí)清理剩余樣品和各種藥品及玻璃器皿，安全退出后再打開所有紫外燈輻照滅菌30分鐘。

 (6)送檢樣品在檢驗(yàn)前應(yīng)保持外包裝完整 ，不得開啟，以防污染。檢驗(yàn)前，用75%的酒精棉球消毒外表面，必要時(shí)用點(diǎn)燃的酒精棉進(jìn)行滅菌。

 (7)每次操作過程中，均應(yīng)做空白對照 ，以檢查無菌操作的可靠性。

 (8)吸取菌液時(shí) ，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管，如吸管碰到手及其它未滅菌的物體，必須重新更換，以防污染。

 (9)接種針每次使用前后 ，必須通過火焰燃燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。

 (10)帶有菌液的吸管、試管等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%的來蘇兒溶液的消毒桶內(nèi)消毒，24h取出沖洗；培養(yǎng)皿則需在高壓滅菌器中重新滅菌后方可處理營養(yǎng)基，切記不要直接沖入下水道中，防止阻塞。如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或 3%的來蘇兒傾覆在被污染處至少 30min，再做處理，工作衣帽等受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。